色譜柱的使用、注意事項、連接和維護

建議使用以下操作方法來維護反相色譜柱。關於其他類型色譜柱（體積排阻色譜[SEC]、正相色譜 [NPC]、離子交換色譜 [IEC]、手性色譜）的特殊注意事項、流動相兼容性和色譜柱再生程序，請參考其他參考文獻（見文末）或供應商的色譜柱說明。

1. 使用方法

• 將反相色譜柱儲存在乙腈或甲醇或水與有機溶劑的混合物中。
• 將未使用的色譜柱用“堵頭”蓋好，以防止色譜柱乾涸。
• 使用前一定要用強溶劑（乙腈或甲醇）沖洗色譜柱，以去除任何高保留的分析物。
• 如果要注入"髒"樣品，請使用保護柱或在線過濾器。
  
  

2. 注意事項

• 請勿超過色譜柱的 pH 值範圍和溫度/壓力上限（硅膠反相色譜柱的 pH 值範圍通常爲 2~8, 60~80℃, 6000~18000 psi）。
• 注：許多現代 HPLC 硅膠色譜柱可在 1.5~10 的更寬 pH 值範圍內使用（例如使用多官能團硅膠的混合相和鍵合相）。
• 切勿讓緩衝液在色譜柱內靜止不動。
  
  

3. 色譜柱連接

不鏽鋼接頭和卡套用於 HPLC 或 UHPLC 系統內的高壓流體連接。對於 HPLC 色譜柱連接，使用手擰式且可重複使用的 PEEK 接頭更爲方便。用於色譜柱入口連接的超高效液相色譜配件將在後期的內容中介紹。請注意，普通的液相色譜 PEEK 管接頭可用於超高效液相色譜柱出口與檢測器的連接。

對於選擇使用不鏽鋼接頭和卡套進行色譜柱連接的用戶，以下是一些建議和指南。

• 使用 Parker、Swagelok 或 Rheodyne 的 1/16′′ 壓縮螺母和卡套。它們與大多數色譜柱兼容，並可相互交換。Waters 色譜柱使用 Waters 接頭。在安裝新卡套時，確保卡套管在接頭內"見底"。請參見圖 1，瞭解卡套、形狀和各種接頭在卡套管底部的正確插入深度。

• 在一般應用中使用外徑爲 1/16′′ 和內徑爲 0.007′′ 的不鏽鋼或 PEEK 卡套管，在窄孔和超高效液相色譜柱中使用 0.003~0.005′′ 卡套管。不鏽鋼管可以用切割輪進行方形切割，但通常需要購買內徑較小（<0.007′′）的預製管。

• 請注意，安捷倫系統使用的是外徑爲 1/32′′ 的毛細管，兩端用短的 1/16′′ 管支撐。內徑分別爲 0.08 mm（黑色）、0.12 mm（紅色）或 0.17 mm（綠色）（0.003′′~0.007′′）。

• 手擰式 HPLC 接頭和 PEEK 管（<5000 psi）方便、便宜且易於使用。請注意，PEEK 與 GPC（凝膠滲透色譜） 常用的 DMSO、THF 和二氯甲烷不兼容。

4. 色譜維護和再生

• 典型的色譜柱使用壽命爲 3-24 個月或 1000-3000 次進樣，具體取決於流動相類型和進樣情況。
• 色譜柱的性能（效率）會隨着時間的推移而降低，表現爲壓力和峯寬的增加。
• 監測色譜柱的壓力和柱效，並立即採取糾正措施；不要等到色譜柱堵塞時才採取措施。
• 如果壓力異常高，請儘快嘗試用強溶劑反向沖洗色譜柱。某些高效液相色譜柱的入口過濾片堵塞後可以更換。
• 使用一系列強溶劑沖洗色譜柱，使其再生，可恢復受污染色譜柱的性能。對於反相色譜柱，可依次使用水、甲醇、二氯甲烷和甲醇。儘可能參考供應商的說明。
• 如果高效液相色譜柱入口處出現色譜柱"空洞"，可通過使用類似填料填充入口空洞來恢復某些性能。
• 一般來說，使用較小顆粒填料的超高效液相色譜柱由於效率高、柱體積小而難以修復。

其它類型色譜柱使用和維護方法參考文獻：

1. Snyder, L.R. and Kirkland, J.J. (2010). Introduction to Modern Liquid Chromatography, 3e. Hoboken, NJ: Wiley. Chapters 5, 11 and 17.
2. Snyder, L.R., Kirkland, J.J., and Glajch, J.L. (1997). Practical HPLC Method Development, 2e. New York: Wiley-Interscience.